EMSA-NFkB


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1. 非放射性EMSA的種類與相關(guān)產(chǎn)品 - 見EMSA產(chǎn)品目錄

2.  微奧基因非放射性 EMSA產(chǎn)品信息:

微奧基因擁有多項(xiàng)關(guān)于EMSA的獨(dú)特技術(shù)。非放射性EMSA及其相關(guān)產(chǎn)品是微奧基因在全球推出的很成熟的產(chǎn)品之一。EMSA產(chǎn)品特性;

微奧基因的EMSA成套試劑包括探針、轉(zhuǎn)運(yùn)膜、化學(xué)發(fā)光底物等所有試劑,到貨后即可以進(jìn)行EMSA測定。客戶不需要花時(shí)間合成與標(biāo)記探針或購買其它試劑。
微奧基因出售的所有EMSA產(chǎn)品都經(jīng)過測試,保證出結(jié)果。

微奧基因出售針對(duì)特異性TF的EMSA成套試劑的測定條件都經(jīng)過優(yōu)化。我們要求用戶按照步驟操作,不要改變?nèi)绾螚l件。用戶不需要 花時(shí)間自己摸索實(shí)驗(yàn)條件,出了問題也容易找出原因。
微奧基因有專人負(fù)責(zé)EMSA產(chǎn)品配置并經(jīng)過檢測,出錯(cuò)的可能很小。
微奧基因唯一一家具有各種針對(duì)特定TF的陰性與陽性對(duì)照。是我們有條件進(jìn)行實(shí)際EMSA測試。
由于每種產(chǎn)品都做過實(shí)驗(yàn)測定,測定條件也已經(jīng)確定,用戶不需要 花時(shí)間自己摸索實(shí)驗(yàn)條件。
有中文與英文操作手冊供用戶選擇。
 
EMSA技術(shù)支持
盡管注意到了以上的問題,有時(shí)候還是沒有拿到理想的結(jié)果。對(duì)于可能出現(xiàn)的問題,用戶需要能夠發(fā)現(xiàn)問題,找出解決辦法。如何客戶愿意找我們共同分析,我們也會(huì)通過力所能及的幫助。現(xiàn)在使用我們的產(chǎn)品與服務(wù)單位比較多。許多出現(xiàn)問題的用戶,在我們的幫助下,都拿到了理想結(jié)果,許多并已經(jīng)發(fā)表了文章。相信 陸續(xù)會(huì)有許多文章發(fā)表。
我們能夠回答有關(guān)EMSA實(shí)驗(yàn)的所有問題。歡迎來電與我們洽詢 。
我們的技術(shù)人員對(duì)EMSA非常熟悉,知道怎么分析結(jié)果,能夠解決EMSA測定中的有關(guān)的問題。
如果你在北京或上海,我們的專家可以上門通過協(xié)助用戶的實(shí)驗(yàn)。
我們提供EMSA技術(shù)服務(wù)以展示微奧基因?qū)λ_發(fā)的EMSA技術(shù)的信心。
 
用戶的反饋
網(wǎng)上可以查到買其它公司的EMSA產(chǎn)品 做不出結(jié)果的求助信息,但基本查不到用微奧基因產(chǎn)品做不出結(jié)果的記錄 。
使用微奧基因產(chǎn)品與服務(wù)的客戶滿意度為99%以上。

微奧基因公司的客戶很多, 我們在此列出了一部分。歡迎客戶來電了解更多情況。

已有200多篇文章發(fā)表(查看)。 

? NF-кB EMSA Kit [Cat# TFDET001]

4-1,非放射性NF-kB試劑盒[目錄號(hào):TFDET001]

NF-kB最初被鑒定為在B細(xì)胞中和免疫球蛋白k輕鏈的增強(qiáng)子結(jié)合。但隨后在非B-細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中被發(fā)現(xiàn),形成NF-kB和IkB的復(fù)合物。最初在DNA結(jié)合蛋白復(fù)合物中分離的NF-kB是由p65(RelA)和p50構(gòu)成的異源雙聚體。其他分離的單體包括p49(也可稱為p52),p75(c-Rel),p68(RelB)。p65,p68,p75單體起反式激活作用。 p50,p49(p52)單體具有DNA結(jié)合活力,但只具有微量的反式激活作用。據(jù)報(bào)道p49和NF-kB的單體p65形成具有轉(zhuǎn)錄活力的異源雙體,類似于p50/ p65異源雙體。p49/ p65和p50/ p65異源雙體在細(xì)胞質(zhì)中受一種叫IkBa/MAD-3的抑制劑調(diào)節(jié)。IkB和p65單體結(jié)合,阻制了細(xì)胞核中的定位和DNA的結(jié)合。 在體外高濃度的p65能形成同源雙聚體,能和DNA微弱地結(jié)合。Poly(dI:dC)能抑制這一反應(yīng)(14)。p49和p50也能形成同源雙聚體,但在細(xì)胞中的濃度很低。NFkB NF-kB

通常,在作NF-kB的凝膠遷移實(shí)驗(yàn)時(shí),在20ul的反應(yīng)體積中,有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles 的NF-kB9寡核苷酸(pH7.9), 50mMKCl, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油, 0.05%NP-40。 當(dāng)用純化的蛋白時(shí),250-300ng足以形成凝膠遷移復(fù)合物,而需用10ug的HeLa細(xì)胞核抽提物。凝膠遷移復(fù)合物在室溫中保溫30分鐘,在50mMTris(pH8.3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝膠電泳中分離凝膠遷移復(fù)合物。含考馬斯蘭和二甲苯藍(lán)色素的加樣溶液只能加入到陰性對(duì)照反應(yīng)中,因這兩種色素會(huì)加劇NF-kB復(fù)合物的解離。 當(dāng)用HeLa細(xì)胞核抽提物作為結(jié)合蛋白來源時(shí),可形成兩種序列特異的凝膠遷移復(fù)合物,即p50/p50同源雙聚體和p50/ p65異源雙聚體。在表達(dá)p49,p50,p65的細(xì)胞中,可檢測到4個(gè)序列特異的凝膠遷移復(fù)合物(p49/ p49,p50/ p50,p50/ p65,p49/ p65),如果存在高濃度的p65,可檢測到微量的p65/p65。 下列試劑可加強(qiáng)NF-kB在體外的結(jié)合:mM級(jí)的GTP,ATP,精胺,亞精胺,鋇或鈣離子,ng級(jí)的Co3+(NH3)6。

參考資料:
Urban M B et al 1991 EMBO J 10(7), 1817
Baeuerle P A 1991 Biochim Biophys Acta 1071, 63

4-2,非放射性STAT5試劑盒[目錄號(hào):TFDET004]

4-2,非放射性STAT5試劑盒[目錄號(hào):TFDET004]

STAT(Signal Transducer and Activator of Transcription)5 - 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5,屬STAT蛋白家族,是一種tyrosine磷酸化轉(zhuǎn)錄因子,羧基端少數(shù)氨基酸序列不同。有STAT5A和STAT5B兩種亞型,具有95%的同源性。

STAT5的活化與腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切,有文獻(xiàn)報(bào)道ALL(急性淋巴細(xì)胞白血病)、AML(急性髓細(xì)胞白血病)等白血病有JAKs,Stat1、3、5的活化,ALL以Stat5活化為主,在Stat5活化的AML病例中,有部分只有STAT5B活化而無Stat5A活化。另外,在各種人固體瘤和血液惡性瘤中,STAT蛋白(尤其是STAT3和STAT5)經(jīng)常被過度活化。持續(xù)的STAT3和STAT5信號(hào)系統(tǒng)連續(xù)的反調(diào)控核基因的表達(dá),促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的生長和生存,常常導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生。因此,可將STAT蛋白家族做為腫瘤治療的理想靶點(diǎn),研究它們參與整個(gè)腫瘤細(xì)胞生長過程的調(diào)控機(jī)制,分析它們在細(xì)胞中的活化和抑制過程,為腫瘤的治療提供新思路。

STAT5在細(xì)胞中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)主要通過JAK(JAK酪氨酸蛋白激酶)/STATs信號(hào)途徑完成,STAT5通常位于胞漿中。當(dāng)細(xì)胞因子與相應(yīng)受體結(jié)合,激活與受體相聯(lián)的JAK激酶磷酸化(免疫沉淀法實(shí)驗(yàn)證實(shí)在用GM-CSF處理后僅JAK2的酪氨酸被磷酸化)。磷酸化的JAK激酶使STAT5單體磷酸化,被磷酸化的STAT5單體與受體分離并與已經(jīng)活化的其他STATs蛋白形成同源或異源二聚體,二聚體轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核與相應(yīng)的DNA結(jié)合并激活轉(zhuǎn)錄。從激活酶動(dòng)力學(xué)角度講,STAT5被細(xì)胞因子激活后用STAT5抗體可檢測到2個(gè)條帶,上方一條是與細(xì)胞因子刺激無關(guān)的組成性酪氨酸磷酸化,下面一條被激活的是STAT5B,在1 min內(nèi)被磷酸化,并隨蛋白質(zhì)的磷酸化的不同而遷移。有實(shí)驗(yàn)表明STAT5A比STAT5B更易于激活。

參考資料:

  1. Imada K,Leonard W J.The JAK-STAT pathway, J. Mol Immunol, 2000, 37:1-11

    Magrassi L,De Fraja C,Conti L,et al.Expression of the JAK and STAT superfamilies in human meningiomas, J. Neurosurg, 1999,91:440-446.

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